亚洲日韩乱码中文无码蜜桃臀,无码人妻久久一区二区三区不卡,把高冷校花压在桌上进进出,国产亚洲精品久久久久久国模美

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 分子克隆實(shí)驗(yàn)---第三章:測(cè)序結(jié)果解讀

    分子克隆實(shí)驗(yàn)---第三章:測(cè)序結(jié)果解讀

    發(fā)布時(shí)間: 2025-03-31  點(diǎn)擊次數(shù): 68次

    一代測(cè)序是克隆實(shí)驗(yàn)中常見的下游實(shí)驗(yàn)。現(xiàn)代 DNA 測(cè)序技術(shù)源于 Sanger 鏈末端終止測(cè)序法,其工作原理與 Sanger 測(cè)序不同的是 4 組反應(yīng)的雙脫氧核苷酸分別用不同的熒光分子標(biāo)記,每個(gè)試管的產(chǎn)物在光激發(fā)下發(fā)出不同顏色的熒光,延伸反應(yīng)和鏈終止完成后,將全部 4 組反應(yīng)物混合,在同一泳道進(jìn)行凝膠電泳,通過(guò)激光束激發(fā)熒光分析不同位置堿基的熒光顏色完成測(cè)序分析。


    一般情況下,測(cè)序信號(hào)文件多為 *.ab1 文件,該文件能夠得到每個(gè)堿基的測(cè)序峰型及整體質(zhì)量;*.seq 文件則為 ab1 文件導(dǎo)出得到的測(cè)序結(jié)果序列,ab1 文件中已具有堿基序列信息,因此 *.seq 文件可不作重點(diǎn)關(guān)注。


    一代測(cè)序的每次測(cè)序反應(yīng)能夠產(chǎn)生約 600-900bp 堿基信息,測(cè)序開始的 5 端約 50bp 左右的測(cè)序信號(hào)不穩(wěn)定,檢測(cè) 800bp 左右之后信號(hào)開始衰減,各種波之間有重疊等情況。這部分結(jié)果信息不準(zhǔn)確,不建議參考使用。

    理想狀態(tài)的測(cè)序信號(hào)應(yīng)當(dāng)是獨(dú)立單一的峰形信號(hào),波峰與波谷清晰,峰與峰之間的距離均勻,波峰底部沒有雜峰干擾,此時(shí)得到的堿基信息可信度超高;測(cè)序信號(hào)出現(xiàn)雙峰、套峰等情況時(shí),該處堿基信息可信度低,需要其他測(cè)序結(jié)果共同比對(duì)分析



           

    測(cè)序問(wèn)題的主要原因:
    ◆ 套峰
    a) 全雙峰:多引物結(jié)合位點(diǎn)(菌液、質(zhì)粒);非特異擴(kuò)增(PCR 產(chǎn)物);
    b) 前雙峰:多引物結(jié)合位點(diǎn),其中一套模板測(cè)序中斷(菌液、質(zhì)粒);多引物結(jié)合位點(diǎn)(PCR
    擴(kuò)增未純化產(chǎn)物);引物二聚體或小片段干擾(PCR 產(chǎn)物純化非切膠樣品);
    c) 中間雙峰:非單克?。ň骸①|(zhì)粒);堿基缺失或等位基因雙模板(PCR 擴(kuò)增未純化產(chǎn)物);
    d) 后雙峰:非單克隆(菌液、質(zhì)粒);堿基缺失(PCR 產(chǎn)物)。


    ◆ 測(cè)序信號(hào)

    a) 無(wú)信號(hào):引物結(jié)合位點(diǎn)不存在或被破壞;
    b) 信號(hào)差:引物或模板的質(zhì)量不高,或引物和模板匹配性低,或樣本濃度偏低;
    c) 信號(hào)衰減:可能因測(cè)序序列的特殊結(jié)構(gòu)導(dǎo)致,如 Poly 結(jié)構(gòu)、重復(fù)序列、回文結(jié)構(gòu)、發(fā)卡結(jié)構(gòu)、GC 富集、AT 富集等;若為正常峰形后逐漸衰減,可能模板反應(yīng)量不足;
    d) 信號(hào)中斷:模板存在高級(jí)結(jié)構(gòu),導(dǎo)致 dNTP 和 ddNTP 在某位點(diǎn)無(wú)法與模板結(jié)合;
    e) 測(cè)序移碼:測(cè)序開端移碼可能是引物降解,局部移碼可能樣本存在高級(jí)結(jié)構(gòu);

    f) 測(cè)序底峰干擾:可能測(cè)序引物不純;可能測(cè)序樣品不純混有正、反向引物。


    優(yōu)化方案:套峰

    二聚體、小片段干擾:凝膠電泳,切膠純化回收;                                                          
    多引物結(jié)合位點(diǎn):更換引物測(cè)序或反向測(cè)通;
    堿基缺失:構(gòu)建單克隆后測(cè)序;
    非單克隆:在載體構(gòu)建克隆正確下重新挑取單克隆測(cè)序;
    非特異性擴(kuò)增:優(yōu)化反應(yīng)條件重新制備;

    等位基因雙模板:構(gòu)建單克隆后測(cè)序。


    測(cè)序信號(hào)

    無(wú)信號(hào):更換引物或重新提供樣品測(cè)序;
    信號(hào)差:提供高質(zhì)量樣品測(cè)序;
    信號(hào)衰減:特殊結(jié)構(gòu)導(dǎo)致衰減,建議反向測(cè)序拼接;若正常峰形后逐漸衰減:提供高質(zhì)量樣品;
    測(cè)序中斷:建議反向測(cè)序測(cè)通;
    測(cè)序底峰干擾:重新制備模板,引物 PAGE 膠純化。


    安培生物致力成為推動(dòng)生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

    深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O(shè)在廣東,服務(wù)面向全國(guó)。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號(hào)傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)??梢栽诘谝粫r(shí)間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持,深厚的人脈資源使得我們?cè)谌珖?guó)主要城市擁有眾多的合作伙伴,安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國(guó)內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商,公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨,配合優(yōu)秀的銷售隊(duì)伍以及專業(yè)的技術(shù)支持,隨時(shí)為客戶提供服務(wù)












產(chǎn)品中心 Products
野花 高清 中文 免费 日本| 日韩久久无码免费毛片软件| 99国内精品久久久久久久| 18禁高潮出水呻吟娇喘MP3| 国产大片免费观看软件| 东北妇女精品BBWBBW| 精品乱子伦一区二区三区| 特黄特色大片免费播放器图片| 强开小婷嫩苞又嫩又紧视频韩国| 久久精品A亚洲国产V高清不卡| 伸进去摸老妇的毛| 性少妇JEALOUSVUE成熟| 内射人妻无码色AV麻豆| 又大又紧又粗C死你视频| 久久影院午夜理论片无码| 国产毛片久久久久久国产毛片| 最近2019年日本中文免费字幕| 丰满人妻一区二区三区免费视频 | 高潮H跪趴扩张调教男男视频| 久久久久无码专区亚洲AV| 女人做爰全过程免费观看美女| 欧美激情AAAAAAAA片| 国产亚洲精品无码成人| 11孩岁女精品A片BBB| 成人电影在线观看| 63歳の熟女セックス| 迎合疯狂肉伦耕耘播种| 精品国产AⅤ无码一区二区| 捏胸吻胸添奶头GIF动态图| 欧美肥胖老太玩黑人| 男男啪啪激烈高潮cc漫画免费| 黄色电影免费看| 欧美黑人粗暴多交高潮水最多 | 精品久久久久久亚洲综合网| 娇妻被朋友日出白浆抖内| YYYY111111少妇影院| 高潮娇喘抽搐A片无码黄| 18无码AV精品一区二区三区| 精品久久久噜噜噜久久久| 小少爷撅着屁股挨C双龙若| 和山田进行LV999的恋爱|