實(shí)驗(yàn)原理：

Dot blot是一種半定量的蛋白質(zhì)或核酸檢測(cè)方法，其原理是將待測(cè)物直接滴于固相載體上，然后通過(guò)特異性抗體或探針與待測(cè)物結(jié)合，最終通過(guò)可視化方法來(lái)檢測(cè)目標(biāo)分子的存在與否。

溶液配置：

操作步驟：

（1）減取適當(dāng)大小的PVDF膜，于甲醇活化1分鐘；

（2）將活化后的PVDF膜于ddH2O中，在脫色搖床上清洗15分鐘；

（3）提取預(yù)冷離心機(jī)，將樣品在4℃低溫條件下8000 rpm離心15分鐘，取上清作為樣品（分泌型蛋白）。

（4）取出活化后的PVDF膜在室溫晾至半干，看見水膜消失即可。將收集的上清、空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照分別取5ul點(diǎn)樣至PVDF膜上，風(fēng)干。室溫待樣品吸收，樣品吸收后點(diǎn)樣處顏色加深。

（5）封閉：待PVDF膜上樣品干燥后，于含5%脫脂奶粉的TBST溶液中封閉，37℃培養(yǎng)箱孵育2h或者4℃過(guò)夜孵育。

（6）TBST清洗PVDF膜5次，每次5分鐘。

（7）一抗孵育：用含5%脫脂奶粉的TBST溶液以1：10000的稀釋比稀釋一抗，37℃培養(yǎng)箱孵育2h或4℃過(guò)夜孵育。

（8）TBST清洗PVDF膜5次，每次5分鐘。

（9）二抗孵育：用含5%脫脂奶粉的TBST溶液以1：10000的稀釋比稀釋二抗，37℃培養(yǎng)箱孵育1.5 h。

（10）TBST清洗PVDF膜5次，每次5分鐘。

（11）曝光：用濾紙吸干PVDF膜上的TBST溶液，滴加ECL超敏顯色劑（A液：B液=1：1），提前將化學(xué)曝光儀預(yù)冷，進(jìn)行曝光，觀察并記錄結(jié)果。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物致力成為推動(dòng)生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O(shè)在廣東，服務(wù)面向全國(guó)。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號(hào)傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

可以在第一時(shí)間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們?cè)谌珖?guó)主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國(guó)內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊(duì)伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時(shí)為客戶提供服務(wù)。