二、線性化載體

三、純化PCR、酶切產(chǎn)物并連接

將反應(yīng)結(jié)束的產(chǎn)物進(jìn)行純化，純化所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好，目前有多種試劑盒可供選擇；

連接線性化載體和PCR產(chǎn)物，可根據(jù)DNA連接酶試劑盒說明書設(shè)置，對于較大的片段可以選擇4℃連接過夜。

四、細(xì)菌轉(zhuǎn)化

冰上解凍克隆感受態(tài)細(xì)胞（DH5α）；取重組產(chǎn)物，加至感受態(tài)細(xì)胞中，冰上靜置30min，42℃水浴熱激45s，迅速置于冰上2-3min；加入600μL LB液體培養(yǎng)基,37℃搖菌1h。

PCR正常反應(yīng)結(jié)束后用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測，選擇正確條帶的菌液加入對應(yīng)的培養(yǎng)基，37℃搖起來。

注意事項：

②菌落PCR反應(yīng)程序變性94℃4-5min即可保證外源DNA釋放出來。

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深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

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