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    免疫細(xì)胞傳代后多久適合進(jìn)行轉(zhuǎn)染?

    發(fā)布時(shí)間: 2023-02-06  點(diǎn)擊次數(shù): 1093次
       理想免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法應(yīng)具有效率高、細(xì)胞毒性小、重復(fù)性好、安全、簡單等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)是目前轉(zhuǎn)染效率高的方法,同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜,常常對細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性,在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,則各有其特點(diǎn)。
      常見實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞傳代方法有貼壁細(xì)胞用消化法傳代和懸浮生長的細(xì)胞采用離心分離后傳代。貼壁細(xì)胞消化時(shí),因細(xì)胞對胰酶的敏感程度不同,所以消化時(shí)間差別較大。對于初學(xué)者,消化程度也很難掌握好,加入適量胰酶,輕輕搖晃3-4次(使細(xì)胞充分與胰酶接觸),隨即吸取胰酶,放于培養(yǎng)箱消化,數(shù)分鐘后取出,輕拍培養(yǎng)瓶,見細(xì)胞自瓶壁滑下即可,若沒有則繼續(xù)消化。
      細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指取對數(shù)生長的細(xì)胞,接種于培養(yǎng)板,加培養(yǎng)液,培養(yǎng)過夜(細(xì)胞長至85-90%滿);按說明書進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)注意預(yù)備脂質(zhì)體/DNA混合物必須在無血清下進(jìn)行。在轉(zhuǎn)染之前更換培養(yǎng)基,可提高轉(zhuǎn)染效率,但所用培養(yǎng)基必須37℃預(yù)溫。脂質(zhì)體/DNA混合物應(yīng)當(dāng)逐滴加入,盡可能保持一致,從培養(yǎng)皿一邊到另一邊,邊加入邊輕搖培養(yǎng)皿,以確保均勻分布和避免局部高濃度。
      對于細(xì)胞轉(zhuǎn)染,一般在細(xì)胞中期轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染效率會(huì)相對高一些。這個(gè)時(shí)候的細(xì)胞狀態(tài)是的。對于轉(zhuǎn)染的佳時(shí)間是在傳代后24hr以內(nèi)。轉(zhuǎn)染后48hr,外源基因肯定是有表達(dá)的。至于72hr,應(yīng)該也還是有表達(dá)的,可能表達(dá)量會(huì)很低,主要是這個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞大部分都衰老了。建議293T收集細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染后36-48hr收集。
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