材料與儀器

新鮮豚鼠血
Hanks液 小牛血清 199培養(yǎng)液 生理鹽水 氯化鈉溶液
離心管 離心機

步驟

1.  AET-RRBC制備

注意事項

1. 分離B細胞過程較長，為了避免B細胞自然死亡，在最后沖洗B細胞時可以用1640,而且要加入5一10%的小牛血清。

2. 每次洗滌時，不要將試管底部液體吸干，即防止壓積的B細胞接觸空氣。

3. 使用抗B淋巴細胞血清與受檢細胞按NIH方法進行微量B細胞毒試驗，使用倒置相差顯微鏡讀數(shù)。

常見問題

關于從小鼠脾臟中分離：

1.脾臟組織所含結締組織比較少，可以直接在篩網(wǎng)上研磨，無需剪碎，也不用顧慮血管。

2.ficoll中含多聚糖，所以許多人喜歡把它放4度存放，是否室溫對實驗影響不大脾臟分離淋巴細胞實驗比較簡單，所以用普通的淋巴細胞分離液就行。

3 .離心2000rpm×20min，這步很關鍵，還有就是加細胞懸液時一定要貼壁緩慢加入，不要破壞分界面，分離液與細胞懸液我常用1：2，還有就是所選用的離心管粗細也會影響分層。

4.中間的懸浮白色環(huán)狀細胞層即是所要的淋巴細胞層。

5.洗細胞主要是洗去分離液，所以不能省去。