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    CaCl2 法制備感受態(tài)細(xì)胞

    發(fā)布時(shí)間: 2021-12-24  點(diǎn)擊次數(shù): 1483次

    材料與儀器

    【 器材 】 1 .培養(yǎng)皿 2 .恒溫培養(yǎng)箱 【試劑 】 1 . LB 培養(yǎng)基 2 .選擇性 LB 瓊脂培養(yǎng)平板(含氨芐青霉素,終濃度為 50μg/ml ) 3 .氨芐青霉素 100 mg/ml 4 .宿主細(xì)菌:經(jīng) 100 mmol/L CaCl 2 處理的感受態(tài)細(xì)菌 DH5α

    步驟

    取 50 μL 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞,加入適量質(zhì)粒(體積不得超過(guò) 4 μL )冰浴 30 min 后, 42℃ 熱激 90 s ,馬上放回冰上,冰浴 2 min ;加 400 μL LB 培養(yǎng)基,于 37℃ 搖床慢搖振蕩培養(yǎng) 45-60 min ;取 50-100 μL 涂在含有氨芐青霉素( 100 μg/mL )的 LB 固體培養(yǎng)基上, 37℃ 倒置培養(yǎng)過(guò)夜。

    注意事項(xiàng)

    嚴(yán)格按照順序加入試劑

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