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    RAW264.7細(xì)胞太容易分化,到底怎樣才能養(yǎng)好它?

    發(fā)布時間: 2021-12-02  點(diǎn)擊次數(shù): 3847次

    養(yǎng)好RAW 264.7之基礎(chǔ)篇



    養(yǎng)好RAW 264.7的第一步,是要對它的基礎(chǔ)培養(yǎng)條件了如指掌,比如生長特性、細(xì)胞形態(tài)、所需的培養(yǎng)基,甚至培養(yǎng)環(huán)境、傳代比例等等,做到知己知彼,才能百戰(zhàn)百勝。


    細(xì)胞名稱

    RAW 264.7 (小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)

    細(xì)胞別稱

    RAW264; RAW2647; RAW 264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; RAW 264.7

    種屬

    小鼠(雄性,成年BALB/c鼠)

    組織來源

    Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤

    生長特性

    貼壁細(xì)胞

    細(xì)胞形態(tài)

    不規(guī)則形(圓形、短梭形)

    生長培養(yǎng)基

    DMEM+10% FBS+1% P/S

    培養(yǎng)環(huán)境

    氣相:95%空氣;5%CO2  溫度:37℃

    推薦傳代比例

    1:3 - 1:6

    凍存液配方

    55% DMEM+40% FBS+5% DMSO


    圖片

    ▲RAW 264.7生長圖片


    養(yǎng)好RAW 264.7之進(jìn)階篇1


    除了基礎(chǔ)條件,其他外界因素也容易引起細(xì)胞的“小脾氣",比如運(yùn)輸路上的顛簸、傳代方法等等。針對幾種常見的問題,小普來一 一為大家解答。


    問題1 :收貨后,細(xì)胞不見了


    小普總是會收到這類反饋:收到細(xì)胞,期待值滿滿地打開包裝,但在顯微鏡下卻找不到細(xì)胞!


    這是為RAW 264.7 細(xì)胞貼壁較松,快遞運(yùn)輸路上受到顛簸,可能會脫落。脫落的細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中不容易聚焦。


    這時候不用擔(dān)心,把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置兩個小時就可以看到了。


    如果靜置后看到的細(xì)胞仍偏少,請將瓶子里的培養(yǎng)基都轉(zhuǎn)移到離心管里,1200rpm(約250g)離心3分鐘,即可看到沉淀的細(xì)胞。


    細(xì)胞全部脫落,慌亂之下可能會一個細(xì)胞都找不著。這個時候離心驗證是較為合適的方法。


    問題2 :收貨處理后,細(xì)胞不貼壁


    將細(xì)胞離心收集,用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞放到新的培養(yǎng)瓶里之后,可能會出現(xiàn)細(xì)胞成團(tuán)漂浮、不貼壁的情況。


    這種情況下,把細(xì)胞離心收集,用1mL培養(yǎng)基重懸,慢慢地,輕輕地吹打,直到細(xì)胞被吹成單細(xì)胞,就可以重新鋪板了。


    RAW 264.7脫落后傾向于抱團(tuán),抱團(tuán)時細(xì)胞是活著的,但很難貼壁。記得一定要把聚成團(tuán)的細(xì)胞吹散成單細(xì)胞,不然細(xì)胞很難重新貼壁。


    養(yǎng)好RAW 264.7之進(jìn)階篇2


    正確的傳代方法是養(yǎng)好RAW 264.7的關(guān)鍵,每一步操作都要細(xì)致入微,稍有不慎細(xì)胞就分化了。


    RAW 264.7不能用胰酶消化,許多實驗室用細(xì)胞刮傳代,這是一種非常經(jīng)典好用的方法。


    小普在養(yǎng)RAW 264.7細(xì)胞這十幾年里,摸索出一個更不錯的方法:吹打傳代。


    吹打傳代操作簡單,對養(yǎng)細(xì)胞的萌新們更友好,也能更好地控制細(xì)胞分化率。



    吹打傳代步驟

    01

    輕拍幾下培養(yǎng)皿

    02

    用1ml 的槍或者巴氏管把細(xì)胞吹下來(吹不下來的舍棄)

    03

    細(xì)胞吹下來后轉(zhuǎn)移到15ml離心管

    04

    1200rpm(約250g) 離心3min

    05

    去上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞

    06

    按比例接種到新的培養(yǎng)皿中



    吹打傳代時機(jī)

    01

    吹打傳代時機(jī)

    02

    當(dāng)細(xì)胞密度較低的時候,可能不太好吹下來。

    03

    當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%的時候,最容易吹下。

    圖片

    推薦傳代的密度


    養(yǎng)好RAW 264.7之終結(jié)篇


    講了那么多如何處理RAW 264.7分化的情況,那分化了的細(xì)胞到底是什么形態(tài)呢?


    圖片

    分化的RA264.7

    分化的細(xì)胞呈多角形,體積明顯增大時常有較長的黑色觸角。






    注意事項


    1

    RAW 264.7細(xì)胞三天不傳代更容易分化,很難吹下,每一次接種密度都要控制好;

    2

    分化的細(xì)胞貼壁牢固,傳代的時候請勿強(qiáng)制性吹下這些細(xì)胞,只接種容易吹下的那些未分化細(xì)胞;

    3

    吹打的力度一定要輕,切勿暴力吹打;


    4

    細(xì)胞的貼壁性和培養(yǎng)器皿的材料也有關(guān),有時RAW 264.7 會出現(xiàn)太容易吹下的情況,連分化細(xì)胞都貼壁較松,此時更適宜用巴氏管吹打;

    5

    培養(yǎng)時,無法保證100% 不分化,通過傳代可以將分化比例控制在一定范圍;

    6

    RAW 264.7分裂活躍,記得每天看一看,周末也要抽點(diǎn)時間關(guān)心一下它哦~


    養(yǎng)細(xì)胞不易,每個細(xì)胞對我們而言,都像是寶寶,含在嘴里怕化了,捧在手里怕摔了。


    正是因為對科研的無畏堅持,讓我們更有力量接受考驗,因為科研本身,值得敬畏和付出。



    圖片



    RAW 264.7的起源


    加利福尼亞索爾克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV(Abelson鼠科白血病病毒)誘發(fā)腫瘤的腹水中建立了RAW 264細(xì)胞系。


    他發(fā)現(xiàn)RAW 264可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖,并且能通過抗體依賴途徑分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。


    RAW 264.7不分泌A-MuLV(但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清檢測到病毒),對LPS非常敏感。該研究1978年發(fā)表在《CELL》雜志。


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