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    上海中科院藥物所高效轉(zhuǎn)染BV-2小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞的操作方法

    發(fā)布時間: 2021-11-12  點擊次數(shù): 2668次

    上海中科院藥物所,使用zeta life公司Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑成功轉(zhuǎn)染BV-2小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞,其轉(zhuǎn)染條件和操作方法分享如下:


    image.png

    一、轉(zhuǎn)染條件:

    細(xì)胞密度:60左右

    質(zhì)粒DNA濃度:700ng/ul

    質(zhì)粒DNA大小:6500bp

    培養(yǎng)板:24孔板

    轉(zhuǎn)染試劑用量:電訊

    質(zhì)粒DNA用量:電訊

    轉(zhuǎn)染時間:48小時


    二、操作方法:

    提前 1 天接種細(xì)胞:細(xì)胞匯合度在 60-80%左右,再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

    核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘。

    在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物:根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

    細(xì)胞換液:轉(zhuǎn)染 24 小時后對細(xì)胞進(jìn)行正常換液,懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

    分析結(jié)果:質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。


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