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    我的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率低,怎么辦?

    發(fā)布時間: 2021-10-09  點(diǎn)擊次數(shù): 1960次

    脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)指的是,脂質(zhì)包裹待轉(zhuǎn)染DNA形成復(fù)合體,與細(xì)胞膜融合或內(nèi)吞,進(jìn)入細(xì)胞。然而,大量的脂質(zhì)體-DNA復(fù)合體,只有一小部分能運(yùn)送到細(xì)胞質(zhì)并進(jìn)入細(xì)胞核中。

     

    如何提高脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵,就在這一步:提高復(fù)合體進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)的效率。

     

    1、避免使用陰離子試劑,使用新一代聚陽離子試劑,適用范圍廣,毒性相較以前的脂質(zhì)試劑小。

     

    2、使用陽離子脂質(zhì)與DNA的*佳比例,以及一定數(shù)量細(xì)胞的陽離子脂質(zhì)用量??上蛸徺I試劑的公司進(jìn)行詢問。

     

    這是因?yàn)檫^量的脂質(zhì)容易受到培養(yǎng)皿中其他帶電荷物質(zhì)的干擾,如細(xì)胞外基質(zhì)中的硫酸軟骨素。

     

    3、待轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)該從凍存庫中重新培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染過程中,細(xì)胞在匯合狀態(tài)不應(yīng)超過24小時,單層細(xì)胞應(yīng)處于對數(shù)中期。

     

    4、轉(zhuǎn)染過程中,培養(yǎng)基不建議加入抗生素。轉(zhuǎn)染試劑使細(xì)胞通透性增加,進(jìn)入細(xì)胞的抗生素濃度增加,會產(chǎn)生一定的細(xì)胞毒性。

     

    5、某些血清蛋白可能會干擾脂質(zhì)體-DNA復(fù)合體形成,因此應(yīng)在無血清狀態(tài)下形成復(fù)合體,后續(xù)過程可添加血清。

     

    6、提高待轉(zhuǎn)染基因的純度,DNA的260nm:280nm應(yīng)為1.8 。

     

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